Jak pěstovat bakteriální kultury v Petriho misce

Spoluautoři: Meredith Juncker, PhD. Meredith Junker je postgraduální studentka, která pracuje na doktorátu v biochemii a molekulární biologii na Louisiana State University Medical Center. Její výzkum se zaměřuje na proteiny a neurodegenerativní onemocnění.

Počet zobrazení tohoto článku: 166 372.

Přemýšleli jste o pěstování celé kultury bakterií, řekněme, pro vědu nebo pro zábavu? Tato záležitost je kupodivu překvapivě jednoduchá. Vše, co potřebujete, je agarové živné médium, několik sterilních Petriho misek a bakterie!

Příprava Petriho misek

• Nejjednodušší je použít práškový agar. Budete potřebovat 1,2 gramu (½ čajové lžičky) na každých 10 cm Petriho misky.
• V žáruvzdorné nádobě zřeďte agarový prášek v 60 mililitrech (¼ šálku) horké vody. Chápete, 60 ml je na jednu Petriho misku. Sami si spočítejte potřebný podíl.
• Nádobu s vodou a práškem vložte do mikrovlnky a po přivedení vody k varu minutu povařte. Hlavní věc je, že agarový roztok „neutíká“.
• Živné médium se považuje za připravené, když se prášek zcela rozpustí a samotná kapalina zprůhlední.
• Nechte pěstební médium vychladnout a poté pokračujte dalšími kroky.

• Petriho misky musí být sterilní. Sterilní! V opačném případě půjdou výsledky experimentu na pěstování bakterií do odpadu. Pokud si Petriho misky kupujete, měly by se prodávat v hermeticky uzavřených obalech (takové misky jsou předem sterilizovány metodou za studena).
• Vyjměte kelímky z obalu a oddělte poloviny. Velmi opatrně nalijte živnou půdu do spodní poloviny kelímku v tenké vrstvě, jen zakryjte dno.
• Rychle uzavřete Petriho misku, aby se do agaru nedostaly vzdušné bakterie. Nechte Petriho misky v klidu uležet 30–120 minut, dokud živná půda nevychladne a neztuhne (hotová živná půda bude připomínat želé).

• Uložení Petriho misek v lednici zajistí, že se voda nevypaří (a bakterie vodu milují). Navíc živná půda v mrazu trochu ztvrdne a zabráníte tak jejímu náhodnému roztržení při přidávání bakterií.
• Petriho misky by měly být uloženy v chladničce dnem vzhůru. Na víčku se tak nebude hromadit kondenzát, který pak bude odkapávat zpět a kazit živné médium.
• Petriho misky s živnou půdou lze uchovávat v lednici několik měsíců. Když na ně přijde řada, vyjměte kelímky z lednice a nechte je ohřát na pokojovou teplotu.

Rostoucí bakterie

• Přímý kontakt: V tomto případě se bakterie dostanou do agaru přes. ano, přímým kontaktem s ním. Jednou z nejběžnějších metod přesazování tímto způsobem je jednoduše se prstem lehce dotknout povrchu pěstebního média (před nebo po umytí rukou, na tom nezáleží). Případně se ho můžete dotknout nehtem nebo dokonce starou mincí. Můžete jednoduše položit vlas na živnou půdu nebo tam kápnout kapku mléka. V zásadě použijte svou představivost!
• Vzorkování: Tato metoda umožňuje sbírat vzorky mikroorganismů z jakéhokoli povrchu a přenášet je do pěstebního média. Vše, co potřebujete, jsou vatové tyčinky. Jednoduše protáhněte tyčinku tam, kde chcete odebrat vzorek mikroflóry (buď z úst nebo z klávesnice), poté stejným koncem tyčinky přejeďte po povrchu živné půdy (netrhejte ji). Za pár dní uvidíte zajímavé a hrozné výsledky svého experimentu!
• Alternativně lze do Petriho misky přidat mikroorganismy z různých zdrojů – k tomu stačí misku rozdělit na čtvrtiny.
• Jednu čtvrtinu doporučujeme ponechat bez mikroorganismů – jako kontrolní skupinu. To vám řekne, zda byl agar před zavedením bakteriálních vzorků kontaminován.

• Nezapomeňte v každém konkrétním šálku označit, co a kde roste, jinak si to později nepamatujete. Můžete psát fixem.
• Jako zvláštní opatření můžete každý šálek uložit do samostatného sáčku na zip. To poskytne další vrstvu ochrany pro rostoucí bakterie. Pokud je obal průhledný, nebude vám to bránit v prohlížení výsledků.

• Optimální teplota v této fázi je někde mezi 20-37°C. Pokud však potřebujete, aby mikroorganismy rostly pomaleji, vždy je můžete přemístit na chladnější místo.
• Nechte bakteriím růst alespoň 4-6 dní. Během této doby se kultura vyvine docela dobře. O zahájení růstu budete informováni charakteristickou vůní vycházející z Petriho misek.

• Zaznamenejte svá pozorování každého šálku a vyvodte závěry o tom, kde bylo nejvíce bakterií.
• Co to máš v ústech? A na klice? A co klávesnice? Ach, výsledky vás ohromí.
• Pomocí speciální značky můžete sledovat rychlost růstu bakterií každodenním kreslením obrysu kultury na dno Petriho misky. Za pár dní bude dno vypadat jako řez dřeva – všechno je v kruzích!

• Pomocí vatového tamponu dejte do středu kapku něčeho antibakteriálního a poté pokračujte v experimentu jako obvykle.
• Bakterie v kalíšku porostou a vytvoří prstenec kolem oblasti, kde byla antibakteriální látka aplikována. Nebudou tam žádné bakterie, jedná se o takzvanou „mrtvou zónu“.
• Účinnost antibakteriálních látek lze porovnat posouzením šířky mrtvé zóny v různých Petriho miskách. Princip je jednoduchý: čím širší zóna, tím účinnější látka.