Encefalozoonóza králíků

Autor: Kazemirchuk M. S., veterinární lékař – specialista na exotická zvířata, Veterinární klinika ortopedie, traumatologie a intenzivní péče, Petrohrad.

úvod

Králičí encefalitozoonóza je důležitou diagnózou v seznamu diferenciálních diagnóz u králíků s neurologickými, oftalmologickými příznaky a také u králíků s chronickým onemocněním ledvin. Vzhledem k obtížím intravitální diagnostiky se v mnoha případech encefalitozoonóza stává diagnózou vyloučení. Je důležité pochopit, že encefalitozoonóza není jediným onemocněním zajícovců doprovázeným poškozením centrálního nervového systému, a proto je ve všech případech léčby zvířat se známkami poškození vestibulárního aparátu nebo centrálního nervového systému komplexní diagnostika. nutné, podobně jako diagnostika u koček a psů (včetně CT, MRI, myelografie, vyšetření mozkomíšního moku atd.).
Encefalitozoonóza je rozšířené onemocnění dekorativních králíků. Podle zahraničních autorů je asi 50 % zvířat séropozitivních. Bohužel v tuto chvíli zůstává situace ohledně prevalence encefalitozoonózy v Ruské federaci nejasná: není důvod se domnívat, že míra infekce E. cuniculi v Ruské federaci bude nižší než ve Spojených státech nebo evropských zemích.
Intravitální diagnostika encefalitozoonózy je extrémně obtížná a při absenci laboratoří poskytujících diagnostické služby pro toto onemocnění je zcela nemožná.
Encefalitozoonóza králíků je potenciální zooantroponóza a riziko infekce imunokompetentního člověka je minimální. Hlavní rizikovou skupinu tvoří lidé se závažnými imunodeficity (infekce HIV).

Etiologie

Encefalitozoonózu králíků způsobuje obligátní intracelulární sporotvorný parazit – microsporidia Encephalitozoon cuniculi (dříve Nosema cuniculi), zaujímající kontroverzní pozici mezi prvoky a houbami, které se vyznačují nepřítomností mitochondrií a přítomností extruzního aparátu pro pronikání buněčnou stěnou. Izolovány jsou minimálně 3 kmeny: kmen 1 – z králíků, kmen 2 – z hlodavců a kmen 3 – ze psů, přičemž diferenciace kmenů je možná pouze pomocí PCR a v tuto chvíli je přítomnost druhové specifičnosti a možnost mezidruhového přenosu nebyly studovány. Hlavními cílovými orgány E. cuniculi jsou centrální nervový systém (mozek (cerebellum), mícha), oči a ledviny.

Infekční stádium je spóra vylučovaná močí infikovaného králíka. K infekci dochází požitím spor, méně často inhalací. Je možný i vertikální přenos z matky na plod. Po požití spor pronikají do střevní stěny, hematogenně se šíří s makrofágy do ledvin, jater, srdce a mozku. Pomocí extruzního aparátu dochází k průniku stěnou hostitelské buňky, k přenosu sporoplazmy do buňky, mnohonásobné replikaci uvnitř vakuol, což v konečném důsledku vede k destrukci buňky a uvolnění spor do mezibuněčného prostoru. Zničení hostitelských buněk způsobuje zánětlivou reakci a tvorbu granulomů. S rozvojem akutního procesu v ledvinách se výtrusy uvolňují močí do prostředí a dochází k infekci dalších zvířat.
Pro zjednodušení pochopení patologického procesu lze rozlišit 2 stadia onemocnění – akutní (bezprostředně po infekci, provázená tvorbou imunoglobulinů M) a stadium chronického granulomatózního zánětu (provázené tvorbou imunoglobulinů G).
Průběh se může pohybovat od mírného (lehký záklon hlavy) až po extrémně těžký, doprovázený náhlou smrtí.
Encefalitozoonóza je charakterizována dlouhodobým asymptomatickým nosičstvím s reaktivací infekce pod vlivem stresových faktorů roky po infekci. U některých zvířat dojde k úplné eliminaci patogenu během 8 týdnů.

Příznaky

Příznaky encefalitozoonózy do značné míry závisí na průběhu onemocnění a závažnosti poškození určitého orgánového systému. U většiny králíků je encefalitozoonóza asymptomatická a skutečnost infekce může být potvrzena pouze sérologickým vyšetřením.
Lze rozlišit několik skupin příznaků:

• Neurologické: torticollis (boční náklon hlavy podél svislé osy), ataxie, manéžní pohyby, nystagmus, křeče, paréza a paralýza, inkontinence moči.
• Oftalmologické: katarakta, uveitida, hypopyon (častěji se vyvine u zvířat infikovaných transplacentárně).
• Příznaky spojené s rozvojem chronického onemocnění ledvin (polyurie, polydipsie, hubnutí, hyporexie). Encefalitozoonóza je extrémně vzácně doprovázena rozvojem akutního renálního selhání spojeného s granulomatózní intersticiální nefritidou.
• Fokální skleróza myokardu je běžným nálezem při pitvě u králíků. Dodnes nebyla prokázána, ale předpokládá se její souvislost s encefalitozoonózou.

Možnosti diagnostiky

Vyšetření králíka s podezřením na encefalitozoonózu zahrnuje:

• pečlivý sběr anamnézy;
• obecné fyzikální vyšetření;
• neurologické vyšetření;
• klinické a biochemické krevní testy;
• prostý rentgenový snímek hrudníku a břišní dutiny;
• Ultrazvuk břišní dutiny (ledviny, močový měchýř);
• Rentgen bubínkových měchýřů nebo jejich počítačová tomografie;
• ELISA (stanovení imunoglobulinů M a G).

Obecně platí, že diagnostický plán přímo závisí na stížnostech majitelů a problémech zjištěných během počátečního vyšetření.

Při odběru anamnézy je třeba věnovat pozornost místu nákupu zvířete, kontaktům s jinými králíky, kočkami (umožňuje předpokládat toxoplazmózu jako diferenciální diagnózu).
Při neurologickém vyšetření králíka je nutné pamatovat na to, že se jedná o kořist citlivou na stres, a proto se jeho reakce na některé testy může lišit od reakce kočky nebo psa.
Obecný klinický krevní test obvykle nemá specifické změny v případě poškození ledvin v pozdějších stádiích onemocnění může být přítomna azotemie a hyperfosfatemie.
Stanovení titru protilátek proti E. cuniculi Dnes jde o nejcennější studii v diagnostice encefalitozoonózy. Je nutné pochopit: tento test není ideální a na základě výsledků nelze stanovit definitivní diagnózu; hladina titru protilátek nekoreluje se závažností léze; obrovské množství zvířat je po celý život séropozitivních, aniž by vykazovalo známky onemocnění. Tento test však může vyloučit encefalitozoonózu v nepřítomnosti protilátek. To je také jediný způsob, jak provést klinické vyšetření a zlepšení zdravotního stavu skupiny zvířat (což je důležité pro laboratorní zvířata a školky).
Nejinformativnější je paralelní stanovení imunoglobulinů M (akutní infekce) a G (chronické). Interpretace výsledků sérologických studií může být obtížná a měla by být provedena komplexně s přihlédnutím k výsledkům jiných studií (tab. 1).

Další možnosti diagnostiky

Bylo popsáno velké množství testů, které pomáhají stanovit diagnózu encefalitozoonózy, z nichž většina je nízkocitlivá nebo nespecifická, ale umožňují vyloučit jiná onemocnění:

• elektroforéza krevních bílkovin, stanovení bílkovin v akutní fázi zánětu;
• PCR odstraněné čočky (umožňuje definitivní diagnózu);
• PCR moči a mozkomíšního moku (nízká citlivost);
• barvení moči odstředivkou na přítomnost spor (nízká citlivost);
• MRI, CT, myelografie, vyšetření mozkomíšního moku atd.

Diferenciální diagnostika

Seznamy diferenciálních diagnóz sestavené přímo závisí na hlavních klinických příznacích.

1. Záklon hlavy

V první řadě je nutné určit původ vestibulárního syndromu (tab. 2).
Hlavní nemoci doprovázené torticollis jsou uvedeny v tabulce 3.

Zánět středního ucha / labyrintitida

Hlavní diferenciální diagnózou je bakteriální zánět středního ucha/vnitřní, který může být způsoben širokou škálou patogenů. Většina králíků je přenašečem pasteurelózy a bordetelózy a při imunosupresi se může vyvinout klinicky významný zánět středního ucha. Nejčastěji se infekční agens šíří Eustachovými trubicemi. Kromě torticollis syndromu je u králíků často pozorován nystagmus a paralýza obličeje (foto 3).
Diagnóza se provádí na základě počítačové tomografie bubínkových měchýřů v některých případech nejsou dostatečně citlivou diagnostickou metodou.
Léčba se scvrkává na dlouhodobou antibiotickou terapii (výběr antibiotika na základě bakteriologické kultivace) a chirurgickou evakuaci hnisu z bubínkových puchýřů (laterální nebo ventrální bulotomie) (foto 4).

Toxoplasmóza

Králík je mezihostitelem infekce Toxoplasma gondii, když je chován společně s kočkami. Ve většině případů se vyskytuje subklinicky podle zahraničních autorů je séropozitivních asi 20 % králíků. S rozvojem akutní infekce se 7 dní po infekci objevují klinické příznaky (horečka, těžká deprese, třes hlavy, syndrom náhlého úmrtí). Intravitální diagnostika je v mnoha případech obtížná, diagnózu lze potvrdit sérologickým vyšetřením, vyšetřením mozkomíšního moku (PCR + průkaz tachyzoitů), konečná diagnóza se stanoví na základě výsledků histologického vyšetření mozku (granulomatózní meningoencefalitida s ložiskovými ložisky); nekrózy a tachyzoitů).

2. Paréza / obrna pánevních končetin

Hlavní diferenciální diagnózy jsou zlomenina páteře a dislokace nebo subluxace obratlů, spondylóza, míšní absces, novotvary včetně míchy, osteoartróza, protruze meziobratlové ploténky, encefalitozoonóza, toxoplazmóza, ochabnutí nohy, hypovitaminóza A.

3. Záchvaty

Záchvaty jsou multietiologický syndrom a mohou být způsobeny velkým množstvím onemocnění a stavů, jako je bakteriální encefalitida (listerióza), herpesvirová encefalitida, encefalitozoonóza, otrava olovem, fipronil, pyretriny / permethriny, úpal, těhotenská toxémie, hypokalcémie , hypoglykémie, azotémie (ARI, CKD), poruchy elektrolytů, konečné stádium jakýchkoli systémových onemocnění, neoplazie, mozkový absces, migrace larev Baylisascaris, hypovitaminóza A, idiopatická epilepsie, vzteklina.

Léčba králíků s encefalitozoonózou

Doporučuje se zahájit léčbu po sérologické studii v případě zvýšení Ig M. Pokud není možné provést studii, vyloučit nebo potvrdit encefalitozoonózu, provádí se zkušební léčba fenbendazolem nebo albendazolem v kombinaci se širokospektrým antibiotikem ven. Velmi důležitá je i symptomatická terapie (zajištění nemožnosti úrazu, umělé krmení, steroidy v prvních dnech onemocnění ke snížení zánětlivé reakce (použití je kontroverzní), kontrola záchvatů (diazepam, propofol), užívání léků proti nevolnosti / kinetóza (serenia, cerucal, meclizin, difenhydramin atd.), léčba doprovodných patologických stavů (korneální vřed, močová dermatitida), kontrola funkce gastrointestinálního traktu Bohužel v současné době většina léků neprošla úplnými studiemi u králíků s encefalitozoonózou , a doporučení k použití vycházejí výhradně ze zkušeností jednotlivých autorů.
Prvních 3-5 dní po onemocnění je vhodné provádět ošetření v nemocničním prostředí a po stabilizaci celkového stavu (chuť k jídlu, stolice, pomočování) propustit zvíře k ambulantnímu ošetření.
Je důležité upozornit majitele, že léčba ne vždy vede k úplnému vyléčení a často záklon hlavy zůstává po celý život, zatímco králík se adaptuje a žije s uspokojivou kvalitou života.

Seznam použité literatury:

1. Harcourt-Brown FM Encephalitozoon cuniculi infekce u králíků. Semináře z ptačí a exotické medicíny domácích zvířat, svazek 13, č. 2 (duben), 2004. – S. 86-93.
2. Gregory Rich. Klinická aktualizace metod testování encephalitozoon cuniculi u klinicky nemocných králíků. Journal of Exotic Pet Medicine, Vol 19, No 3 (červenec), 2010. – S. 226–230.
3. Carolyn Crayová. Hladiny proteinu akutní fáze u králíků s podezřením na infekci Encephalitozoon cuniculi. Journal of Exotic Pet Medicine, 22, 2013. – S. 280–286.
4. Alessandro Melillo. Aplikace elektroforézy sérových proteinů v exotické medicíně. Vet Clin Exot Anim, 16, 2013. – S. 211–225.

Autor:
Kategorie: Léčba exotických zvířat

Encephalitozoon cuniculi je mikrosporidní patogen savců, který je rozšířen po celém světě a může infikovat různé druhy savců, včetně člověka. E. cuniculi je obligátní intracelulární parazit, který je členem třídy Microsporidia. Fylogenetický původ mikrosporidií je předmětem neustálých diskusí, protože mají mnoho jedinečných vlastností, které je znesnadňují srovnání s jinými organismy. Zpočátku se věřilo, že Microsporidia postrádá mitochondrie, a proto byly klasifikovány jako prvoci, ale molekulární analýza umožnila překlasifikovat Microsporidia na houby. Microsporidia produkují perzistentní spory ve vnějším prostředí a žijí a rozmnožují se pouze životem v jiných buňkách, a proto jsou parazity. Microsporidia mají unikátní metodu infikování jiných buněk, která zahrnuje speciální aparát, který jim umožňuje zavést spory přímo do hostitelské buňky, alternativní způsob infekce je mechanismus fagocytózy plísňových spor. Encefalozoonóza je závažné onemocnění králíků chovaných v zajetí. Jeho prevalence je zaznamenána po celém světě. U králíků E. cuniculi způsobuje onemocnění ledvin, centrálního nervového systému a očí. Ve většině případů je postižen centrální nervový systém mnohem méně často, onemocnění je vyjádřeno jinými znaky, ve vzácných případech jsou zaznamenány kombinované příznaky; Mnoho lékařů uvádí vestibulární dysfunkci jako jeden z nejčastějších klinických příznaků spojených s chronickou infekcí. E. cuniculi. Většina králíků s neurologickými příznaky má pouze vestibulární dysfunkci. Typicky se vestibulární příznaky objevují náhle a mohou zahrnovat záklon hlavy, ataxii, kroužení a rotaci podélné osy. Někdy mohou být jemné známky kymácení v klidu nebo mírná ataxie jediným příznakem vestibulární dysfunkce u králíků s encefalozoonózou. Naprostá většina zvířat s vestibulárními poruchami nevykazuje jiné klinické příznaky ani v případech těžkých forem záklonu hlavy, chuť k jídlu a aktivita zůstávají na stejné úrovni. Stupeň sklonu hlavy však může být hlavním prognostickým parametrem u králíků, přičemž nejhorší prognózu mají zvířata vykazující časté převalování a ležení na boku. Obrázek od Frank Künzel et al 2017 Mezi další neurologické příznaky spojené s encefalozoonózou patří záchvaty, parézy, houpání nebo kývání v klidu a změny chování. Typické oční léze spojené s tímto onemocněním jsou běžně známé jako fakoklastická uveitida, která je charakterizována vývojem bílých nitroočních hmot obvykle lokalizovaných v blízkosti předního pouzdra čočky. Nejčastěji trpí fakoklastickou uveitidou mladí jedinci s jednostrannými změnami mnohem méně často. Králíci s očními lézemi spojenými s encefalozoonózou obvykle nevykazují žádné další klinické abnormality. Zhoršení zraku způsobené šedým zákalem často neovlivní kvalitu života králíka. Obrázek z Frank Künzel et al 2017 Většina králíků s onemocněním ledvin spojených s E. cuniculi jsou pozorovány nespecifické příznaky, jako je polydipsie, polyurie, nedostatek chuti k jídlu, ztráta hmotnosti, dehydratace. Podezřením na toto onemocnění může být zvýšení hladiny močoviny a kreatininu u králíků středního a staršího věku. Imunologicky kompetentní jedinci produkují specifické protilátky proti E. cuniculi, které lze detekovat pomocí ELISA. Vysoký titr protilátek může sloužit jako prognostický znak: titr protilátek 800 nebo vyšší je považován za pozitivní na přítomnost patogenu E. cuniculi v těle. Hlavním problémem sérologických testů je však to, že nejsou komerčně dostupné pro široké použití a navíc detekují pouze IgG protilátky, přičemž důležitým kritériem pro přítomnost aktuální infekce je přítomnost IgM protilátek. V současné době se diagnostika patogenu zaměřuje na detekci spor mikrosporidií ve vzorcích moči, stolice a tkání. Malá velikost a špatná barvitelnost encefalozoálních organismů ztěžuje jejich vizualizaci pomocí konvenčních parazitologických a histologických metod. Při barvení hematoxylinem a eosinem je lze snadno přehlédnout, zvláště jsou-li přítomny v malých množstvích. Navíc techniky barvení nelze obecně použít k rozlišení mezi druhy mikrosporidií. Spolehlivou metodou by mohla být elektronová mikroskopie, která však vyžaduje mnoho času a drahé technické vybavení. Molekulárně genetická identifikace pomocí PCR je dobrou alternativou k jiným metodám, protože má výrazně vyšší senzitivitu a specificitu. V medicíně je PCR standardní metodou pro detekci mikrosporidií u lidí. Ukázalo se, že metoda PCR má dobrou citlivost při vyšetření oční tekutiny. Detekce E. cuniculi v moči také nezpůsobuje obtíže, ale průkaz mikrosporidií v tomto případě ne vždy odráží klinický obraz a může být spojen s nosičstvím patogenu. Zároveň se ukázalo, že PCR má nedostatečnou senzitivitu při vyšetření mozkomíšního moku za přítomnosti neurologických známek. Specialisté laboratoře Zaitsev+ v reakci na četné požadavky veterinárních specialistů vyvinuli a otestovali diagnostickou metodu E. cuniculi metodou PCR. V současné době se tato metoda používá jako rutinní diagnostika encefalozoonózy u králíků. Jako klinický materiál se používá moč a nitrooční tekutina. E. cuniculi cirkuluje v populacích králíků po celém světě a kromě nich má celou řadu dalších hostitelů, nejen savců, ale i ptáků. Lidé jsou také náchylní k encefalozoonóze u králíků, zejména u těch s oslabeným imunitním systémem. V tomto ohledu diagnostika E. cuniculi u králíků je důležitý i pro člověka. Reference:

1. Frank Künzel. Klinické příznaky Diagnostika a léčba infekce Encephalitozoon cuniculi u králíků. Vet Clin Exot Anim 21 (2018) 69–82
2. La’Toya V Latney. Encephalitozoon cuniculi u králíků v zájmovém chovu: diagnostika a optimální léčba. Dovepress, Veterinary Medicine: Research and Reports 2014:5 169–180.
3. Barbara Hinneyová. Více než králičí příběh e Encephalitozoon spp. u volně žijících savců a ptáků. International Journal for Parasitology: Parasites and Wildlife 5 (2016) 76e87
4. Craig E. Greene. Infekční onemocnění psů a koček, čtvrté vydání. 2012.

Doplňkovou metodou pro diagnostiku onemocnění jako FIV, VLK a virové peritonitidy je stanovení virové zátěže (kvantitativní stanovení koncentrace patogenu v biomateriálu). Tato studie pomůže vybrat taktiku léčby, předpovědět průběh onemocnění a zvolit přístup k chovu nemocných zvířat.
Dále navrhujeme nový diagnostický profil pro komplexní stanovení FIV a VLK v různých biomateriálech těla zvířete, který nám umožňuje nejspolehlivější identifikaci patogenu v těle. Protože podle patogeneze se jeho lokalizace může v různých obdobích lišit.

Vážené kolegyně a kolegové!
Upozorňujeme na soupravy pro diagnostiku zvířecích infekcí metodou real-time PCR od společnosti Zaitsev+. Všechny byly testovány v naší laboratoři.

Katalog a informace o sadách naleznete na webových stránkách pcr-kit.ru nebo volejte +7 (495) 150-08-07